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核酸内切酶的简单应用

发表时间:2022-11-11  |  点击率:108
  一、核酸内切酶(endonuclease)在核酸水解酶中,为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶,与核酸外切酶相对应。从对底物的特异性来看,可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶;RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般来说,大都不具碱基特异性,但也有诸如脾脏RNase、RNaseT1等或限制性内切酶那种能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。
 
  二、原理作用:
 
  (1)限制性酶切反应速度与底物的性质有很大的关系,底物的单双链结构、分子的构型、DNA链中酶识别位点的数目以及位点附近的序列等都影响着酶的催化反应。共价闭合环(超螺旋构型)DNA比其相应的线性分子的酶解作用要慢,要使超螺旋构型DNA降解,需要的酶量就大。
 
  (2)对于DNA-RNA杂合双链的酶切作用,Molloy等用EcoRI等8种酶切时,结果其DNA链可被切割,但酶用量比双链DNA大20-50倍。部分限制性酶还可切割单链DNA,如HaeⅢ等。
 
  三、分类:
 
  (1)Ⅰ型限制酶为复合功能酶,具有限制-修饰两种功能,但在DNA链上没有固定的切割位点,一般在离切割位点1kb到几kb的地方随机切割,不产生特异性片段。
 
  (2)Ⅲ型酶与Ⅰ型酶基本相似,不同的是Ⅲ型酶有特异性的切割位点,但这两类酶对DNA酶切分析的意义不大,通常所说的限制性内切酶是指Ⅱ型酶,它能够识别与切割DNA链上的特定的核苷酸顺序,产生特异性的DNA片段。