25-羟基维生素对光照、温度、反复冻融敏感，样本前处理的目标是快速分离基质，减少目标组分降解，规范保存是控制样本稳定性，保证后续检测结果准确，整套流程分为样本采集后即时处理、离心分离、分装、避光保存、复融管控、不合格样本处置。
样本采集完成后，在规定时间内完成静置凝固，随后离心分离血清或血浆，离心参数稳定，分离操作避免剧烈溶血。溶血样本中释放的细胞组分干扰检测，溶血严重的样本不继续检测。离心完成后，快速吸取上层血清，避免吸取底层血细胞，血细胞内的基质组分持续释放，会加速目标物降解。
分装环节优先小体积分装，避免大体积样本反复冻融。反复冻融是样本偏差主要来源，每次冻融都会造成目标组分降解，分装后每个子样本满足单次检测用量，一次用完。分装容器选用适配的材质，容器内壁无吸附，容器提前编号，标注采集时间、样本信息。
从分离完成开始，全程避光管控，25-羟基维生素见光易分解，操作时避开强光、紫外光源，分装容器优先选用避光管，或者避光袋包裹。短期不能检测的样本，置于冷藏避光环境；长期保存转入低温冷冻环境，冷冻存放同样避光，冰箱内避免光照直射。
样本转运时使用保温容器，维持温度稳定，减少温度波动，转运过程避光，避免长时间置于室温环境。样本入库建立台账，记录采集时间、处理时间、分装时间、储存位置、冻融次数，严格管控冻融次数，记录每一次解冻记录。
样本解冻操作必须避光，在低温环境下缓慢解冻，或者按照检测方法要求复温，解冻后轻柔混匀，不要剧烈震荡，混匀后尽快上机检测，解冻后的样本不宜再次冷冻留存。如果样本出现明显脂血、溶血，标记后评估是否适合检测，脂血样本基质干扰风险更高，需要匹配对应的前处理净化步骤。
前处理净化环节，根据检测方法选择沉淀、萃取等方式，净化过程控制光照与温度，缩短样本在室温暴露时长。净化后的待测液稳定性弱于原始血清，净化完成后尽快检测，不长期存放。定期核查储存样本，超出稳定时限的样本不再用于检测。整套规范以快速分离、避光、少冻融、稳定温控为核心，降低前处理和储存环节带来的降解与基质干扰。
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