细胞冻存液的使用步骤

分类与成分：

‌传统含血清冻存液‌：

配比为培养基:胎牛血清:DMSO=7:2:1，胎牛血清提供生长因子保护细胞，DMSO作为渗透性抗冻剂抑制冰晶生成，成本较低，适合普通科研细胞系使用。

‌无血清冻存液‌：

不含动物源成分，配方明确，从根源避免了血清带来的外源污染风险，批次稳定性更高，进一步提升了使用安全性与便捷性。

细胞冻存液的使用步骤：

冻存步骤：

收集对数生长期的细胞，离心，弃上清

加入预冷冻存液，调整细胞密度至 1×10⁶ ~ 1×10⁷ cells/mL

分装至冻存管，标记信息

放入程序降温盒（或异丙醇冻存盒），置于-80℃过夜

转移至液氮罐长期保存

复苏步骤：

从液氮/-80℃取出冻存管，立即放入37℃水浴中快速解冻（≤60秒）

解冻后立即加入10倍体积预温培养基稀释，中和DMSO

离心，弃上清，去除残留冻存液

加入新鲜培养基重悬，接种至培养容器，镜检观察