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生物素概述和生物素化3种试剂的蛋白质标记等特性

发表时间:2022-07-22  |  点击率:257
一、生物素简介
 
生物素(biotin,B)分子量244.31D.生物素分子有两个环状结构,其中Ⅰ环为咪唑酮环,是与亲和素结合的主要部位;Ⅱ环为噻吩环,C2上有一戊酸侧链,其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的结构,经化学修饰后,生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。
 
生物素是水溶性B族维生素,以前称为维生素H或辅酶R。它是羧化酶的辅酶,其与缬氨酸、脂肪酸、异亮氨酸等的合成有关。
 
连接各种反应基团的生物素被用来标记蛋白质或抗体。生物素标记的蛋白或抗体可用链霉素耦联的HRP或磁珠进行检测或纯化。
 
 
二、生物素化试剂包含3种:
 
a. 伯胺反应性生物素化试剂
 
伯胺生物素化试剂基于水溶性分为两组:NHS-酯和磺基-NHS-酯。
 
1.NHS-酯的特点:
 
蛋白质标记-生物素化抗体或其它蛋白质,用于检测或纯化;
 
细胞内标记-膜渗透性,可用于标记细胞内部;
 
胺反应性-与伯胺(-NH2)反应,例如赖氨酸的侧链或N端伯胺;
 
溶解性-水不溶性,必须溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性缓冲液中进一步稀释。
 
2.磺基-NHS-酯的特点:
 
蛋白质标记-生物素化抗体,用于固定、纯化或检测;
 
细胞表面标记-不穿透质膜,仅生物素化细胞的表面蛋白;
 
胺反应性-与伯胺(-NH2)反应,例如赖氨酸的侧链或N端伯胺;
 
溶解性-易溶于水,可用于不能耐受有机溶剂的应用。
 
b. 巯基反应性生物素化试剂
 
巯基反应性生物素化试剂分为两类:生物素-HPDP和碘乙酰基-LC-生物素。
 
1.生物素-HPDP的特点:
 
蛋白质标记-生物素化抗体或其它蛋白质;
 
巯基反应性-与巯基(-SH)反应,例如半胱氨酸(C)的侧链;
 
吡啶基二硫醇活化-在pH6.5至7.5的缓冲液如PBS中反应;
 
可逆-形成二硫键,其可以使用DTT或其它还原剂切割;
 
溶解性-水不溶性,必须溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性缓冲液中进一步稀释。
 
2.碘乙酰基-LC-生物素的特点:
 
蛋白质标记-生物素化抗体或其它蛋白质;
 
细胞内标记-膜可透过,可用于标记细胞内部;
 
巯基反应性-与巯基(-SH)反应,例如半胱氨酸(C)的侧链;
 
碘乙酰激活-反应在pH7.5至8.5的Tris或硼酸盐缓冲液中避光进行;
 
不可逆-形成不可逆性硫醚键,间隔臂不能被切割;
 
溶解性-水不溶性,必须溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性缓冲液中进一步稀释。
 
c. 羰基反应性生物素化试剂
 
生物素-酰肼是通常用于靶向聚糖和糖蛋白的蛋白修饰试剂。
 
生物素-酰肼的特点
 
糖蛋白标记-在唾液酸残基上生物素化糖基化蛋白,用于检测或纯化;
 
细胞表面标记-生物素化和分离细胞表面糖蛋白;
 
醛反应性-与糖基高碘酸盐氧化形成的醛反应;
 
酰肼活化-在pH值为4~6的缓冲液如乙酸钠中进行反应;
 
不可逆的-形成半不可逆性腙键;间隔臂不能被切割;
 
溶解性-通常溶于DMSO,然后在水溶性缓冲液中进一步稀释。